臭氧缓释水凝胶止血及促伤口愈合作用(2)

1.4.3 水凝胶微观形貌观察 取0.5 g 臭氧缓释水凝胶均匀涂于玻璃皿底部，涂层厚度约为1 mm。然后置于-80 ℃冰箱冷冻1 h 以上，使用真空干燥箱进行干燥，将干燥后的样品黏附在铜台表面，喷金2 min 后扫描电子显微镜下观察实验样品的表面结构。

1.4.4 大鼠肝脏止血实验 参考文献[18-19]制作大鼠肝出血模型。将15 只SD 大鼠随机分为5 组，分别为空白对照组、阳性对照组及低、中、高浓度臭氧凝胶组，每组3 只。麻醉5组大鼠后充分暴露肝脏(图1)，轻柔地拉出肝脏下叶，剪去肝下叶下缘的肝组织，形成长为15 mm 的创面。从创面出血开始计时，空白对照组使用普通清洁纱布止血；阳性对照组使用Celox 止血粉止血；低、中、高浓度臭氧凝胶组分别采用含臭氧浓度(3.)×10-6，(7.)×10-6，(16.)×10-6的臭氧缓释水凝胶覆盖创面，各0.5 mL。每隔10 s 观察有无再出血，以无可见活动性出血为止血时间，观察并记录止血时间。

1.4.5 大鼠背部皮肤伤口愈合实验 参考文献[20-21]制作大鼠背部皮肤伤口模型。将15 只SD 大鼠随机分为5 组，分别为空白对照组、阳性对照组及低、中、高浓度臭氧凝胶组，每组3 只。麻醉5 组大鼠后在脊柱两侧对称做直径为13 mm、深度为皮肤全层的圆形伤口(图2)。空白对照组伤口不作处理；阳性对照组涂抹0.5 mL 京万红软膏(天津达仁堂京万红药业有限公司，Z)；低、中、高浓度臭氧凝胶组分别覆盖含臭氧浓度(2.)×10-6，(7.)×10-6，(15.)×10-6的臭氧缓释水凝胶，各0.5 mL。

各组均覆盖无菌纱布，用胶布固定。每24 h 换药一次，观察伤口愈合情况，拍照并量取伤口横径，观察至术后第14天。计算愈合率，愈合率(%)=(A0-At)/A0×100%，式中A0为原始创面面积，At为未愈合创面面积。

1.5 主要观察指标 臭氧缓释水凝胶的稳定性与止血、促伤口愈合效果。

1.6 统计学分析 实验数据属于计量资料，所有统计数据采用±s描述。使用软件SPSS 22.0 进行数据分析，Graph Pad Prism 8.2.0 作图。多组比较采用单因素方差分析，统计学检验效能设置为P＜ 0.05。

2 结果 Results

2.1 臭氧缓释水凝胶样品 臭氧缓释水凝胶实物样品如图3所示，呈无色透明胶体，具有较好的黏滞力和皮肤延展性。

2.2 臭氧在缓释水凝胶中的稳定性 臭氧稳定性主要与其溶解的介质中酸性物质含量等有关，实验所采用水凝胶中酸性物质含量是相同的，其成分和制备方法相同，因此稳定性也是相同的，具有相似的分解曲线。用碘量法测量水凝胶臭氧浓度随时间变化的趋势结果见图4。

2.3 臭氧缓释水凝胶表面形貌观察 利用扫描电子显微镜观察臭氧缓释水凝胶的表面形貌结构，结果见图5 所示，水凝胶具有均匀的多孔结构，且孔隙相互贯通。

2.4 大鼠肝脏止血实验结果 空白对照组、阳性对照组及低、中、高浓度臭氧凝胶组的止血时间分别为(361.)，(219.)，(461.)，(287.)，(165.) s。统计分析显示，低浓度臭氧凝胶组的止血时间长于空白对照组(P＜ 0.05)，中、高浓度臭氧凝胶组及阳性对照组的止血时间短于空白对照组(P＜ 0.01)，并且高浓度臭氧凝胶组的止血时间短于阳性对照组(P＜ 0.05)，见图6。

2.5 大鼠背部伤口愈合实验结果 术后各组大鼠伤口未出现感染，观察14 d 后伤口基本愈合。各组不同时间点伤口创面愈合情况见图7。术后第4 天，中、高浓度臭氧凝胶组的愈合率高于空白对照组(P＜ 0.05，P＜ 0.01)，同时高于阳性对照组(P＜ 0.05，P＜ 0.01)，5 组其余时间点的愈合率比较差异无显著性意义(P＞ 0.05)，见表1。结果表明，中、高浓度臭氧缓释凝胶具有促进伤口早期愈合的作用，且高浓度臭氧缓释凝胶效果最好。

表1 ｜术后不同时间点各组创面愈合率的比较 (±s，%)Table 1 ｜Comparison of wound healing rate of each group at different time points after operation表注：与空白对照组比较，aP＜ 0.05，bP＜ 0.01；与阳性对照组比较，cP＜ 0.05，dP＜ 0.01组别 第4 天 第6 天 第8 天 第10 天 第12 天 第14 天空白对照组 38. 59. 81. 84. 95. 98.低浓度臭氧凝胶组 42. 52. 73. 85. 96. 94.中浓度臭氧凝胶组 55. 55. 84. 90. 95. 97.高浓度臭氧凝胶组 60. 68. 82. 91. 95. 95.阳性对照组 29. 54. 80. 89. 95. 99.

3 讨论 Discussion

在扫描电子显微镜下可以观察到臭氧缓释水凝胶呈三维网格状结构，网格之间相互交通，该结构具有较好的吸水性，在接触血液时可以吸收血浆，浓缩血液，帮助血小板和红细胞聚集，提高止血效果[22]。有文献表明，氢氧根离子(OH-)是臭氧分解的催化剂[23]，因此在溶液中加入一定的酸性物质可以中和OH-来抑制臭氧的分解，达到稳定臭氧的目的。卡波姆分子结构中含52%-68%的酸性基团，1%水分散体的pH 值为2.5-3.0[24]。卡波姆所形成的凝胶在pH=6-12 时有最大的黏度和稠度，因此一般会加入三乙醇胺等为中和剂中和其酸度而维持较大的黏稠度[25]。经测试，实验制备出的臭氧缓释水凝胶pH 值介于 之间，为弱酸性，有助于保护和稳定臭氧。

文章来源：《功能材料与器件学报》 网址: http://www.gnclyqjxb.cn/qikandaodu/2021/0315/521.html